核心發(fā)明專利獲得授權！集團免疫組庫測序就是這么6
2019-04-15 閱讀數(shù)：9520
近日，廣州華銀健康科技有限公司下屬子公司廣州華銀醫(yī)學檢驗中心自主研發(fā)的《基于分子標記的免疫組庫生物信息分析方法》發(fā)明專利獲得授權。一直以來，廣州華銀健康科技有限公司高通量測序事業(yè)部都專注于免疫組庫測序技術難題的攻克，該專利技術獲得授權，標志著廣州華銀健康科技有限公司在免疫組庫高通量測序產(chǎn)品研發(fā)上的重大突破，也標志著廣州華銀健康科技有限公司自主創(chuàng)新水平再上新臺階。
人類或哺乳動物的適應性免疫系統(tǒng)擁有大量的T細胞受體(TCRs)和B細胞受體(BCRs)，其總和統(tǒng)稱為免疫組庫。免疫組庫高通量測序技術允許對T或B細胞克隆進行深入分析，可以有效評估TCR/BCR互補決定區(qū)域(CDR3)的多樣性，并評估克隆類型的構成：包括特定克隆類型的比例;克隆之間的相似程度;V(D)J的基因使用頻率;核苷酸插入與缺失;CDR3區(qū)域長度分布等信息，為評估健康或疾病狀態(tài)下的機體適應性免疫系統(tǒng)提供了可能。
廣州華銀健康科技有限公司作為國內(nèi)最早開展免疫組庫項目研發(fā)的團隊之一，早于2016年便與南方醫(yī)科大學（前第一軍醫(yī)大學）的科研團隊深度合作，并成功發(fā)表學術論文(Chen, et al. OncoImmunology (2016))。
此次廣州華銀健康科技有限公司推出的全新免疫組庫測序產(chǎn)品，其基于 5'RACE 的原理，在原始模板擴增前引入UMI序列進行文庫構建，并使用具有廣州華銀健康科技有限公司自主發(fā)明專利的UMI標記與校正算法(發(fā)明專利號：201810618023.7)，對PCR擴增與測序過程引入的錯誤與偏倚進行有效糾正，極大提高分析結果的準確度。
專利看點一：UMI減少錯誤與偏移
廣州華銀健康科技有限公司使用具有自主發(fā)明專利的UMI標記與校正算法技術，達到了75%以上的校正比(表1)，有效減少了測序和PCR擴增實驗過程中所引入的錯誤和偏移。
圖1. UMI標記消除測序和PCR擴增的錯誤
本項目所用的UMI(Unique Molecular Indices，分子條形碼)為16nt的隨機堿基短序列，可以看作分子條形碼。將隨機UMI序列于逆轉錄階段引入模板，標記原始樣本中的每個分子，對同一來源的擴增產(chǎn)物進行標記；通過UMI標記與校正算法，可以排除PCR擴增偏好性和建庫過程中造成的誤差，并獲取原始的轉錄本數(shù)量，達到絕對定量。
表1. 經(jīng)過UMI算法校正后的部分測試數(shù)據(jù)校正比例統(tǒng)計表
專利看點二：重復性好，穩(wěn)定性高
廣州華銀健康科技有限公司使用具有自主發(fā)明專利的UMI標記與校正算法技術，發(fā)現(xiàn)在相同的RNA起始量下同一樣本其相關性高且重現(xiàn)性好(圖2)。
圖2. 同一樣本RNA起始量相同時樣本間的相關性圖
（起始RNA量：A1/A2/A3為1600ng; B1/B2/B3為400ng）
對于RNA起始量低或高的樣本，隨著測序深度的增加，均能夠快速達到測序平臺期，即數(shù)據(jù)量能夠滿足后續(xù)分析需求(圖3)。
圖3. 同一樣本RNA起始量不同時到達測序飽和期數(shù)據(jù)統(tǒng)計曲線圖
廣州華銀健康科技有限公司免疫組庫項目分析流程能夠對測序數(shù)據(jù)進行多維度深入挖掘(圖4)，給出最全面的數(shù)據(jù)分析報告，并可按照客戶的需求定制個性化分析服務。
圖4：數(shù)據(jù)分析條目概覽
廣州華銀健康科技有限公司免疫組庫項目部分分析結果展示
樣本的CDR3氨基酸長度分布圖
VJ Combination統(tǒng)計圖
樣本間VDJ基因共線性
樣本Rank abundance分布曲線圖
樣本Diversity分布曲線圖
